麥角(jiǎo)硫(liú)因(yīn)(ergothioneine，EGT)作(zuò)為(wéi)一(yī)種(zhǒng)天(tiān)然(rán)手(shǒu)性氨基酸(suān)衍(yǎn)生物(wù)，存在(zài)硫醇和硫酮兩種互變異(yì)構(gòu)形式(shì)。研究(jiū)表明(míng)EGT可(kě)抑(yì)製脂質過氧化損傷，清除羥(qiǎng)自(zì)由(yóu)基(·OH)，超(chāo)氧化物(wù)和單綫態氧(yǎng)(1O2)等多(duō)種活性(xìng)氧(yǎng)(ROS)物質，是優異的皮膚光(guāng)敏保(bǎo)護(hù)劑(jì)。通過(guò)紫外綫照射(shè)光(guāng)敏劑(jì)羅(luó)丹明(míng)B(RhB)溶液誘發包括(kuò)1O2在內的(dí)自(zì)由(yóu)基體係(簡稱(chēng)UV-RhB體係(xì))，模擬(nǐ)紫外綫照射人體(tǐ)皮膚產生ROS的情況，研究EGT在此(cǐ)體(tǐ)係(xì)下的抗氧化性(xìng)能及其(qí)穩(wěn)定(dìng)性，以(yǐ)期(qī)為EGT應用(yòng)於抗衰護膚品(pǐn)的開(kāi)發(fā)提供理論(lùn)依據。

實驗(yàn)方法(fǎ)

1. UV-RhB體(tǐ)係中(zhōng)EGT和VC抗(kàng)氧化性能(néng)的測(cè)定(dìng)

　　以pH 7.2的(dí)磷酸(suān)鹽(yán)緩衝液(PBS，取2.2 g Na2HPO4，0.3 g NaH2PO4和8.5 g NaCl，加水(shuǐ)溶(róng)解至1000 ml)為溶劑，分別(bié)配製0.001 %羅丹明B溶液(RhB)，0~1.00 mg/ml的EGT溶液及維生素C(VC)溶液。按表(biǎo)1配(pèi)製(zhì)測定(dìng)溶(róng)液體係(xì)I，II，置紫外光(guāng)(波長(cháng)254 nm，光強度(dù)5 mW/cm2)下(xià)照射。分別於(yú)0，1 h時，采(cǎi)用(yòng)酶(méi)標(biāo)儀，測定555 nm波(bō)長(cháng)處吸收值(zhí)(A0和(hé)A1)，每個樣(yàng)品(pǐn)平行3份，計算(suàn)0 h和1 h吸光(guāng)度變化量的平均值(ΔA)，以ΔA空白為基綫，按(àn)下式計(jì)算體係中活性物質的抗(kàng)氧(yǎng)化(huà)性能(F)。F(%)= (ΔA空(kōng)白-ΔA樣品(pǐn))/ ΔA空(kōng)白×100 ΔA空白(bái)式(shì)中，ΔA空白：空白對照溶液(yè)的吸收(shōu)值的(dí)變化量(liáng)(A0空白-A1空(kōng)白);ΔA樣品(pǐn)：樣品溶(róng)液的(dí)吸收(shōu)值的變(biàn)化量(A0樣品(pǐn)-A1樣品)。

2.離子強(qiáng)度對(duì)EGT抗(kàng)氧(yǎng)化(huà)性(xìng)能的影響

　　按表1配製(zhì)測定溶液體係III，EGT溶(róng)液濃度(dù)為0.25 mg/ml，以EGT濃度為(wéi)0的體係(xì)作(zuò)為空(kōng)白(bái)對(duì)照，分別加入NaCl濃度分別為0 %，0.40 %，0.85 %，1.30 %，1.75 %的(dí)PBS。按2.1項下方法平行測(cè)定3份(fèn)，取(qǔ)其平(píng)均值，計(jì)算不同(tóng)離(lí)子(zǐ)強(qiáng)度(dù)體(tǐ)係的ΔA和F值(zhí)。

3.pH值對(duì)EGT抗氧(yǎng)化性能(néng)的影(yǐng)響(xiǎng)‍‍‍‍‍

　　按表1配製(zhì)測定(dìng)溶(róng)液體(tǐ)係IV，EGT溶液(yè)濃度為0.25 mg/ml，以EGT濃(nóng)度為0的體(tǐ)係(xì)作為空(kōng)白對照(zhào)，用0.1 mol/L HCl溶(róng)液和(hé)0.1 mol/L NaOH溶(róng)液(yè)分別調節(jié)PBS緩衝液(yè)pH值為3.0，5.0，7.2，9.0，11.0。按1項下方(fāng)法平行測(cè)定3份(fèn)，取其平(píng)均值(zhí)，計算(suàn)不(bù)同(tóng)pH體(tǐ)係的(dí)ΔA和(hé)F值。

4.還(huán)原劑對(duì)EGT抗(kàng)氧(yǎng)化性(xìng)能(néng)的影響

　　按(àn)表1配(pèi)製(zhì)測(cè)定(dìng)溶液體係V，EGT溶(róng)液濃(nóng)度(dù)為0.25 mg/ml，並(bìng)以EGT濃度為0的(dí)體(tǐ)係(xì)作為空(kōng)白對(duì)照，Na2SO3溶液(yè)以(yǐ)PBS緩(huǎn)衝(chōng)液(yè)為(wéi)溶(róng)劑，濃度分別為(wéi)0 %，0.02 %，0.05 %，0.10 %，0.25 %，0.50 %。按1項(xiàng)下方法(fǎ)平(píng)行測(cè)定(dìng)3份(fèn)，取其(qí)平(píng)均值，計(jì)算不同(tóng)還原劑(jì)濃度(dù)體係的ΔA和(hé)F值(zhí)。

5.金(jīn)屬(shǔ)離子對(duì)EGT抗氧化性(xìng)能(néng)的(dí)影(yǐng)響(xiǎng)

　　按(àn)表(biǎo)1配製(zhì)測定(dìng)溶(róng)液體(tǐ)係VI，其中溶(róng)劑為(wéi)生理鹽水(shuǐ)，EGT溶(róng)液濃度為0.25 mg/ml，並(bìng)以(yǐ)EGT濃(nóng)度為(wéi)0的(dí)體係作為(wéi)空(kōng)白(bái)對照。分(fēn)別加入0.05 mol/L的(dí)K+，Mg2+，Zn2+，Cu2+，Fe3+生理鹽水溶液(yè)。按(àn)1項下方法(fǎ)平(píng)行(háng)測定3份，取(qǔ)其平均值(zhí)，計(jì)算不同金(jīn)屬離子(zǐ)體係的ΔA和F值。

6.EDTA對EGT抗氧化性(xìng)能的影響

　　按(àn)表1配製測定溶液(yè)體係VII，其(qí)中(zhōng)溶劑(jì)為(wéi)生理(lǐ)鹽水(shuǐ)，EGT溶(róng)液濃度為0.25 mg/ml，並(bìng)以(yǐ)EGT濃(nóng)度(dù)為0的體係作(zuò)為空(kōng)白對照。分別(bié)加入0.10 mol/L的(dí)Fe3+溶液和(hé)0 %，0.02 %，0.04 %，0.10 %，0.20 %的EDTA溶液。按1項(xiàng)下(xià)方(fāng)法(fǎ)平行(háng)測(cè)定3份，取(qǔ)其平均(jūn)值(zhí)，計算不(bù)同EDTA濃度(dù)體係的(dí)ΔA和(hé)F值。

實驗結果

1.EGT和(hé)VC的(dí)抗(kàng)氧化(huà)量效(xiào)關係

　　不(bù)同(tóng)濃度EGT和VC的(dí)抗(kàng)氧(yǎng)化性能(néng)見(jiàn)圖1。由(yóu)圖1可見(jiàn)，0~1 mg/ml範圍內(nèi)，EGT和(hé)VC的(dí)F值隨濃(nóng)度的(dí)升高(gāo)而增大(dà)，且(qiě)相(xiāng)同(tóng)濃度(dù)下EGT的F值一直高(gāo)於(yú)VC，表(biǎo)明(míng)EGT和(hé)VC抗(kàng)氧化作用(yòng)具有(yǒu)較好(hǎo)的(dí)量(liáng)效關(guān)係，同(tóng)時(shí)在此體係下EGT的(dí)抗(kàng)氧化(huà)性能優於VC。

2.離子強度對EGT抗氧化性(xìng)能的影響

　　離子(zǐ)強(qiáng)度(dù)對EGT抗(kàng)氧(yǎng)化(huà)性能(néng)的影響見(jiàn)圖2。由(yóu)圖2可見(jiàn)，NaCl濃(nóng)度(dù)在0 %~0.85 %範(fàn)圍(wéi)內，EGT的F值(zhí)較為穩定，當(dāng)NaCl濃(nóng)度(dù)高於(yú)0.85 %時，F值(zhí)急劇(jù)下(xià)降(jiàng)，表(biǎo)明(míng)此(cǐ)時EGT抗氧化(huà)性能受(shòu)到體係內高(gāo)離子(zǐ)強度的(dí)抑(yì)製而(ér)顯著降低。

3.pH值對EGT抗氧化性能的影響

　　pH值對(duì)EGT抗(kàng)氧化性(xìng)能的(dí)影(yǐng)響見圖(tú)3。由(yóu)圖3可(kě)見，在pH 5~9範(fàn)圍內EGT的(dí)F值(zhí)變化(huà)相對較(jiào)小，表明EGT抗氧(yǎng)化(huà)活性在(zài)pH 5~9範圍內(nèi)較(jiào)為(wéi)穩定。

4.還原劑(jì)對(duì)EGT抗(kàng)氧(yǎng)化(huà)性能的影(yǐng)響

　　還(huán)原劑亞硫酸鈉對EGT抗氧(yǎng)化性能的影(yǐng)響見(jiàn)圖4。由圖4可(kě)見(jiàn)，隨(suí)著亞硫酸(suān)鈉濃度的增大(dà)，F值(zhí)呈下降(jiàng)趨勢，表(biǎo)明(míng)在此(cǐ)體係(xì)中(zhōng)加入亞硫酸(suān)鈉可(kě)抑(yì)製(zhì)EGT的抗氧(yǎng)化活(huó)性(xìng)。亞(yà)硫酸鈉(nà)濃度大於(yú)0.1 %時(shí)，F值(zhí)趨(qū)於穩定(dìng)，表(biǎo)明其抑製(zhì)作(zuò)用(yòng)趨(qū)於平緩(huǎn)。

5.金屬(shǔ)離子對EGT抗氧(yǎng)化性能(néng)的影(yǐng)響

　　不(bù)同金屬離子(zǐ)對UV-RhB體(tǐ)係的(dí)影(yǐng)響(xiǎng)見(jiàn)圖(tú)5A。結果(guǒ)顯示，與Na+體係相比，K+，Mg2+，Zn2+體係中(zhōng)ΔA空白變化(huà)較小，表明(míng)加(jiā)入這(zhè)3種離(lí)子對體係內(nèi)RhB的(dí)降(jiàng)解(jiě)速(sù)率影(yǐng)響較(jiào)小(xiǎo);Cu2+對RhB的(dí)降(jiàng)解速率有較(jiào)明顯(xiǎn)的抑製，而加(jiā)入Fe3+後，體(tǐ)係中RhB降解速(sù)率(shuài)顯(xiǎn)著(zhù)提高，分(fēn)析原因為(wéi)Fe3+在水(shuǐ)中形(xíng)成Fe(OH)2+，經光照射生(shēng)成(chéng)Fe2+和羥(qiǎng)自由(yóu)基(jī)，增(zēng)大(dà)了體(tǐ)係內自由基的(dí)濃度(dù)，進(jìn)一步(bù)加劇(jù)了RhB的降(jiàng)解(jiě)。

　　不(bù)同(tóng)金屬(shǔ)離子(zǐ)對EGT抗(kàng)氧(yǎng)化性能(néng)的影響(xiǎng)見(jiàn)圖(tú)5B。結(jié)果顯示(shì)，與Na+體係相比(bǐ)，Zn2+對EGT抗(kàng)氧(yǎng)化性能沒(méi)有(yǒu)明顯影(yǐng)響，K+，Mg2+對(duì)EGT的(dí)抗氧(yǎng)化(huà)作(zuò)用(yòng)有(yǒu)一定程(chéng)度的(dí)抑(yì)製，Cu2+在(zài)抑(yì)製(zhì)RhB降解的同(tóng)時對(duì)EGT的抗氧化性(xìng)能(néng)也(yě)有(yǒu)較為(wéi)明(míng)顯的抑(yì)製(zhì)作用(yòng)。而在(zài)體係(xì)中加(jiā)入Fe3+，RhB降(jiàng)解速(sù)率(shuài)提高的同時(shí)，EGT的(dí)抗(kàng)氧化性(xìng)能也得到了明(míng)顯(xiǎn)的提升(shēng)，這也表(biǎo)明EGT可(kě)有效(xiào)抑製Fe3+誘(yòu)發的氧(yǎng)化(huà)應激(jī)反(fǎn)應。

6.EDTA對EGT抗(kàng)氧(yǎng)化性能的影響

　　EDTA對EGT抗氧(yǎng)化性能的(dí)影響見(jiàn)圖6。由(yóu)圖6可見，在添加(jiā)Fe3+的(dí)體(tǐ)係(xì)中，EGT抗氧(yǎng)化(huà)性能隨EDTA的濃度增(zēng)加而減(jiǎn)小，分(fēn)析原(yuán)因(yīn)為EDTA與Fe3+形(xíng)成(chéng)金(jīn)屬絡合物後降低(dī)了(liǎo)體係(xì)內(nèi)Fe3+的濃度，削弱了(liǎo)Fe3+對(duì)UV-RhB體(tǐ)係和(hé)EGT抗氧化性能的影響(xiǎng)。

　　本(běn)文通(tōng)過建(jiàn)立紫外輻(fú)射光敏(mǐn)劑誘(yòu)發自(zì)由基體係(xì)，測定抗(kàng)氧(yǎng)化(huà)活性(xìng)物(wù)質的抗氧化(huà)性(xìng)能。在此體係(xì)下EGT表現(xiàn)出(chū)優異的(dí)抗氧化性能，且在低離子(zǐ)強(qiáng)度(dù)和(hé)pH 5~9範圍(wéi)內(nèi)具有(yǒu)良(liáng)好(hǎo)的(dí)穩定性(xìng)。