多肽疫(yì)苗是按照(zhào)病(bìng)原(yuán)體(tǐ)抗原基因中(zhōng)已知或預(yù)測(cè)的某(mǒu)段抗(kàng)原表(biǎo)位的氨基酸(suān)序列(liè)，通過化(huà)學合成技術製(zhì)備的(dí)疫(yì)苗(miáo)。基於脂質的(dí)遞送(sòng)係(xì)統已(yǐ)被(bèi)確立為(wéi)誘導體液(yè)和細胞免(miǎn)疫反應的(dí)強(qiáng)大(dà)遞送(sòng)係統(tǒng)，目(mù)前應用最(zuì)為(wéi)廣泛的是(shì)脂(zhī)質體和脂(zhī)質納米(mǐ)粒(lì)(lipid nanoparticle, LNP)。脂質(zhì)體可以(yǐ)包(bāo)裹水溶性和脂(zhī)溶(róng)性(xìng)藥物，增強抗原(yuán)蛋白的(dí)穩(wěn)定(dìng)性(xìng)，並通過(guò)儲存效應(yīng)促進疫苗成分(fēn)的逐漸釋放，更適(shì)合(hé)遞送(sòng)親(qīn)水性多(duō)肽(tài)分(fēn)子，但仍存(cún)在(zài)穩定性(xìng)較差，包封率較(jiào)低的問題。本(běn)研究選(xuǎn)擇(zé)脂質體作為免(miǎn)疫(yì)遞送係統(tǒng)構建(jiàn)多(duō)肽疫(yì)苗，設計(jì)構建了(liǎo)脂質體(tǐ)的處(chǔ)方工藝，並通過單(dān)因(yīn)素(sù)實(shí)驗對脂質(zhì)體(tǐ)製(zhì)備的處(chǔ)方工藝進行優化。

實(shí)驗方(fāng)法

　　超聲(shēng)功(gōng)率(shuài)的(dí)選(xuǎn)擇

　　以優化後的膜材比製備(bèi)脂(zhī)質(zhì)體，在保持(chí)其他(tā)因素不(bù)改變的(dí)情(qíng)況下，考(kǎo)慮(lǜ)到(dào)超聲功率(shuài)過大會(huì)導(dǎo)致大(dà)量發熱，依(yī)次(cì)改(gǎi)變超聲功率(30，40，50，60 W)(儀器(qì)
：超聲(shēng)波細胞(bāo)粉碎機(jī))，繼續進行4組(zǔ)實(shí)驗，分(fēn)別(bié)測(cè)定(dìng)各(gè)組脂(zhī)質(zhì)體粒徑分(fēn)布(bù)和(hé)多分散(sàn)係(xì)數(shù)。

　　超聲(shēng)次數(shù)/時間的(dí)選(xuǎn)擇

　　以優化(huà)後的膜材比，超(chāo)聲功(gōng)率(shuài)製備脂質(zhì)體(tǐ)，在控製其(qí)他因(yīn)素(sù)不改變的情(qíng)況下，依次改(gǎi)變超(chāo)聲次數(30,40,50,60)，繼續進(jìn)行4組實驗，分(fēn)別測定各(gè)組脂質(zhì)體粒(lì)徑分布和多分(fēn)散係(xì)數。

實(shí)驗(yàn)結果

　　超(chāo)聲功率(shuài)的(dí)篩(shāi)選(xuǎn)結果

　　由表1可(kě)知，當(dāng)超(chāo)聲(shēng)功率為30 W，平均粒徑為162.2 nm，PDI為18.3%時(shí)，所製備(bèi)的脂(zhī)質(zhì)體最(zuì)好;當(dāng)超聲功率(shuài)為(wéi)60 W時(shí)，功率較大(dà)導致(zhì)溶液(yè)溫度(dù)明顯升(shēng)高，脂質體的(dí)粒(lì)徑偏大，PDI為(wéi)0.351,分(fēn)散程度也明顯(xiǎn)變(biàn)大，不適(shì)合作(zuò)為製備條件。

　　超(chāo)聲次(cì)數(shù)的篩選結果

　　由(yóu)表(biǎo)2可(kě)知，當(dāng)超聲次數為40次(cì)時，所得脂質體物理(lǐ)性質(zhì)最(zuì)優(yōu)。實(shí)驗過程(chéng)中(zhōng)發現，當超聲(shēng)次數(shù)為60次時，置於(yú)超(chāo)聲破(pò)碎機(jī)內(nèi)的樣(yàng)品溶(róng)液(yè)溫(wēn)度(dù)較高，從(cóng)表(biǎo)2結果也(yě)可(kě)以(yǐ)看出(chū)，過高(gāo)的(dí)溫(wēn)度導(dǎo)致所製(zhì)備(bèi)的脂(zhī)質(zhì)體(tǐ)平均粒徑和PDI升高，提示(shì)在脂(zhī)質體製備(bèi)過(guò)程中(zhōng)要考慮(lǜ)溫度(dù)的(dí)影響。

表1 不同超聲功(gōng)率條件下製(zhì)備脂質(zhì)體(tǐ)的(dí)粒(lì)徑分(fēn)布

表2 不(bù)同超(chāo)聲次數(shù)條件下製備(bèi)脂(zhī)質體(tǐ)的粒(lì)徑(jìng)分(fēn)布

　　脂質體的(dí)理化(huà)性(xìng)質是決定脂(zhī)質(zhì)體(tǐ)發揮作用(yòng)效果的重要(yào)影(yǐng)響(xiǎng)因素(sù)，粒徑及(jí)其分(fēn)布(bù)是(shì)判斷脂質(zhì)體(tǐ)是否合格的重要指標(biāo)。研(yán)究表(biǎo)明，納米(mǐ)顆粒(<200 nm)更(gēng)容易通過淋巴引流進入(rù)淋巴(bā)結，並促進(jìn)抗原(yuán)提(tí)呈(chéng)細(xì)胞的(dí)吸(xī)收，使其更適合(hé)傳遞分(fēn)子(zǐ)佐(zuǒ)劑和抗(kàng)原。單(dān)因素實(shí)驗得到的最優的製備條件為(wéi)
：膜材比(bǐ)5∶1，超聲功率30 W，超聲次數40次，高壓均質(zhì)時間(jiān)6 min，使脂(zhī)質(zhì)體的(dí)平均粒(lì)徑(jìng)從(cóng)329.7 nm減小(xiǎo)至(zhì)132.0 nm，對此(cǐ)製(zhì)備(bèi)流程進行(háng)了驗證，其結果與預期相符(fú)，且(qiě)PDI均在30%以下(xià)，說(shuō)明脂(zhī)質(zhì)體(tǐ)粒徑分布比較均(jūn)匀。