問(wèn)題一，什麼(mó)是(shì)非(fēi)洲(zhōu)豬瘟？

　　非(fēi)洲(zhōu)豬(zhū)瘟(African Swine fever，ASF)是(shì)由非(fēi)洲(zhōu)豬瘟(wēn)病(bìng)毒(dú)(African Swine fever virus，ASFV)感染家豬(zhū)和(hé)各(gè)種野(yě)豬(zhū)(不傳染人(rén))引(yǐn)起一(yī)種急性，出(chū)血性(xìng)，烈(liè)性傳染(rǎn)病。其特(tè)征是發病過程短，最急性和急(jí)性感(gǎn)染(rǎn)死亡(wáng)率(shuài)高達100%，且(qiě)隻能(néng)依靠實驗(yàn)室監測確診。

　　2018年8月(yuè)3日(rì)我國(guó)確診首例非(fēi)洲豬(zhū)瘟疫(yì)情。

問題(tí)二，目前在(zài)中(zhōng)國的傳染(rǎn)範(fàn)圍(wéi)？

　　自(zì)8月(yuè)初(chū)我(wǒ)國首(shǒu)次發(fā)現非洲豬(zhū)瘟以來，截(jié)至11月22日，全國(guó)有20個省(shěng)份47個市(區，盟)發生(shēng)73起家豬(zhū)疫情(qíng)，1起(qǐ)野豬疫情，累計(jì)撲殺(shā)生(shēng)豬(zhū)60萬頭(tóu)。全國(guó)非(fēi)洲豬瘟(wēn)疫情(qíng)呈現多(duō)點散發(fā)狀(zhuàng)態(tài)，但在(zài)各(gè)地動物疾控(kòng)部門(mén)的(dí)積極(jí)行動下(xià)，疫情(qíng)開始(shǐ)趨於平(píng)穩，總體防(fáng)控有效(xiào)。

問(wèn)題三，非洲(zhōu)豬(zhū)瘟(wēn)檢(jiǎn)測的(dí)樣品(pǐn)處(chǔ)理(lǐ)方法介紹

一(yī)，非洲豬(zhū)瘟樣品處理(lǐ)

1. 目的(dí)

　　規範ASFV樣品(pǐn)和(hé)實(shí)驗材(cái)料的(dí)處理(lǐ)程序，保證(zhèng)ASFV相關實驗的(dí)順(shùn)序(xù)開(kāi)展(zhǎn)和(hé)實(shí)驗室(shì)的生物(wù)安(ān)全。

2. 適(shì)用範圍(wéi)

　　適(shì)用於疑(yí)似(sì)ASFV臨(lín)床樣品的(dí)實(shí)驗(yàn)前(qián)的處(chǔ)理

3. 程序(xù)

3.1實(shí)驗材(cái)料(liào)

　　ASF的(dí)易感(gǎn)動物，主(zhǔ)要(yào)為家(jiā)豬(zhū)，野豬和(hé)蜱，通常采集(jí)的樣品(pǐn)為家豬，野(yě)豬(zhū)的(dí)血(xiě)液樣品，組織樣(yàng)品以及蜱(pí)三(sān)類。田間(jiān)采集的(dí)樣品通常(cháng)需(xū)要經(jīng)過簡單(dān)的預處理(lǐ)，才能進行(háng)後(hòu)續的(dí)檢測，診(zhěn)斷工作。

　　血(xiě)清(qīng)：用(yòng)於(yú)病毒(dú)核(hé)酸檢(jiǎn)測(cè)，病毒(dú)抗(kàng)原和抗(kàng)體(tǐ)檢測。將采好(hǎo)的豬血(xiě)的(dí)注(zhù)射器或采血管在室(shì)溫下傾斜靜止(zhǐ)2~4h(防止(zhǐ)暴曬)，或置於(yú)37℃溫箱內(nèi)1h，待(dài)大(dà)部(bù)分血(xiě)清(qīng)析出(chū)後(hòu)，取出血清(qīng)，必(bì)要(yào)時經離心分離血(xiě)清。(最(zuì)低建(jiàn)議量5ml)。

　　抗凝全血(xiě)：用於(yú)病毒(dú)核(hé)酸檢(jiǎn)測和病毒(dú)抗原檢測。

　　采血前(qián)，在(zài)真空采血管或(huò)注射(shè)器(qì)內按比例加入抗(kàng)凝劑(jì)。采(cǎi)集(jí)血(xiě)液，輕輕上(shàng)下(xià)顛倒，使血液(yè)與抗凝(níng)劑充(chōng)分混(hùn)匀，防(fáng)止血液(yè)凝固(gù)的(dí)同(tóng)時避(bì)免(miǎn)溶(róng)血(xiě)。也可(kě)以將(jiāng)血液放入(rù)裝有(yǒu)玻璃珠的滅菌(jūn)瓶內，震蕩(dàng)脫(tuō)落纖維蛋(dàn)白。必要(yào)時，可(kě)加(jiā)入(rù)雙抗以抑製血(xiě)源(yuán)性或(huò)采血過(guò)程中(zhōng)可能(néng)出(chū)現的(dí)細(xì)菌(jūn)汙(wū)染。

　　當血(xiě)樣用(yòng)於(yú)病毒核(hé)酸檢測時，一般(bān)不(bù)用(yòng)肝素而(ér)選用EDTA作為抗凝劑(jì)。(最(zuì)低建議量(liáng)1mL)。

　　組織(zhī)樣本(běn)：活(huó)體采(cǎi)集，采用扁桃體，用於臨床健(jiàn)康動物ASF監測(cè)。

　　屍體剖(pōu)檢ASF發(fā)病(bìng)動(dòng)物(wù)或(huò)死亡動物經(jīng)解(jiě)剖(pōu)取(qǔ)材(cái)，包(bāo)括：ASFV靶器官(guān)的(dí)采(cǎi)集：脾(pí)髒(zàng)，淋(lín)巴結(jié)，腎髒(zàng)，扁桃(táo)體(tǐ)。

　　其他病(bìng)變組織髒(zàng)器(qì)的采集(jí)：采(cǎi)集(jí)具有(yǒu)明顯(xiǎn)病(bìng)變的肝(gān)髒，肺髒(zàng)，心髒(zàng)等(děng)組織(zhī)器(qì)官(guān)，選取部位在病(bìng)變和健康組織(zhī)交界(jiè)處。

　　腐(fǔ)敗動物(wù)屍體的樣(yàng)品(pǐn)采(cǎi)集：剖檢取(qǔ)股骨，將附(fù)著的(dí)肌肉和韌帶等全(quán)部剔(tī)除，采集骨(gǔ)髓。最低建(jiàn)議量5克(kè)。

　　蜱(pí)的(dí)采(cǎi)集：蜱(pí)可(kě)進(jìn)行(háng)核(hé)酸檢測(cè)，抗原檢測(cè)和蜱的(dí)形態(tài)學鑒定，查找(zhǎo)豬圈的(dí)牆邊，牆(qiáng)縫，木(mù)質(zhì)或瓦質的(dí)屋(wū)頂，或挖(wā)掘豬圈地(dì)麵均(jūn)可(kě)能找到(dào)蜱(pí)，也(yě)可查看豬表(biǎo)皮(pí)，采集蜱(pí)。

1-1樣(yàng)品(pǐn)保存(cún)條件

注：用(yòng)於(yú)病(bìng)毒(dú)分(fēn)離和(hé)病理(lǐ)學檢測(cè)的樣品禁止(zhǐ)-20℃保存(cún)。

3.2實(shí)驗(yàn)器材和(hé)試劑

　　台(tái)式高速冷凍(dòng)離心機(jī)，組織研(yán)磨儀(yí)，水浴(yù)鍋，計時器(qì)，冰(bīng)箱和移液(yè)器等。

　　無菌(jūn)的(dí)剪子(zǐ)，鑷子，鋼(gāng)珠，2mLEP管，移(yí)液(yè)器吸頭(tóu)(10μL,200μL，1000μL)等。

　　其他(tā)試劑和耗材(cái)主要(yào)包括(kuò)：0.01mol/L PBS(PH7.2)，0.8%NaOH，75%酒(jiǔ)精棉(mián)球等。

3.3樣品(pǐn)處(chǔ)理(lǐ)程序

3.3.1血清(qīng)及(jí)全血(xiě)樣(yàng)品(pǐn)處(chǔ)理

　　取(qǔ)血(xiě)清(qīng)或全血樣(yàng)品1mL於滅菌EP管(guǎn)裏，保(bǎo)存(cún)備(bèi)用

3.3.2組(zǔ)織樣品處(chǔ)理(lǐ)

　　適(shì)用於(yú)脾髒等組織樣品和(hé)蜱(pí)的(dí)處(chǔ)理。盡可能減少(shǎo)汙染，每(měi)取一(yī)個組織塊(kuài)或(huò)蜱，用火(huǒ)焰(yàn)消毒剪鑷(niè)等取(qǔ)樣(yàng)器械(xiè)，組織塊(kuài)應分別放入滅(miè)菌(jūn)容(róng)器(qì)內並立即(jí)密(mì)封，做(zuò)好(hǎo)標(biāo)記，注意(yì)防(fáng)止組織(zhī)間(jiān)相互汙染。

    3.3.2.1組(zǔ)織樣品的(dí)處(chǔ)理應在二(èr)級(jí)生物安全櫃中(zhōng)進行，勿使(shǐ)液(yè)體濺到生物(wù)安(ān)全(quán)櫃(guì)中

　　3.3.2.2將(jiāng)0.1-0.2g組(zǔ)織(zhī)塊(kuài)放入(rù)2mLEP管中(zhōng)，用(yòng)剪刀(dāo)剪成(chéng)碎塊(kuài)，加1-2mL0.01mol/L PBS(PH7.2),再加入(rù)1-2粒(lì)滅菌鋼珠(zhū)，密(mì)封後(hòu)，表(biǎo)麵(miàn)消毒備(bèi)用。剩餘樣品放回容器內，重(zhòng)新密(mì)封，表麵消(xiāo)毒後(hòu)保存(cún)-70℃冰(bīng)箱。

　　3.3.2.3組(zǔ)織樣品的破碎可以(yǐ)利用(yòng)組織(zhī)研磨(mó)儀在(zài)生(shēng)物(wù)安全櫃外操作，將(jiāng)樣品(pǐn)製成(chéng)組織懸液(yè)。

　　重磅推(tuī)薦使用(yòng)Scientz-48L冷(lěng)凍(dòng)型(xíng)高(gāo)通(tōng)量(liáng)組(zǔ)織研(yán)磨器!

3.4病(bìng)毒(dú)滅活(huó)

　　病毒的滅(miè)活處(chǔ)理應(yīng)在(zài)二級生物(wù)安全(quán)櫃中(zhōng)進(jìn)行(háng)，將(jiāng)處(chǔ)理(lǐ)好的血(xiě)清，全血或者研(yán)磨破(pò)碎(suì)後的組織(zhī)樣品連同(tóng)EP管放入60℃水(shuǐ)浴中，放(fàng)置30min滅(miè)活(huó)。

3.5使用後(hòu)儀(yí)器處理(lǐ)

　　剪刀，鑷子(zǐ)等(děng)均應(yīng)放入(rù)消毒缸(gāng)進(jìn)行(háng)消毒(dú)，放入鐵(tiě)飯(fàn)盒(hé)內，並(bìng)裝入密(mì)封(fēng)袋內(nèi)進行(háng)高(gāo)壓滅(miè)菌(jūn)處(chǔ)理(lǐ)。裝(zhuāng)有組(zǔ)織樣品保(bǎo)存液的容(róng)器和盛(shèng)有組織塊的離心管應密封管口(kǒu)，表麵(miàn)消毒後(hòu)放入密封袋中高壓(yā)滅菌。鋼珠，吸(xī)頭等廢棄物應用(yòng)0.8%NaOH浸泡30分鐘消毒後(hòu)，置(zhì)密(mì)封袋(dài)內(nèi)高壓滅菌(jūn)。消毒殘液(yè)應裝入(rù)密封(fēng)容器(qì)內高壓(yā)滅菌(jūn)處理。

3.6注(zhù)意(yì)事(shì)項

　　操作(zuò)之前要確認生物安(ān)全(quán)櫃和(hé)實(shí)驗(yàn)室(shì)已進(jìn)行了(liǎo)徹底的衛(wèi)生消毒處(chǔ)理，防止(zhǐ)樣品間交(jiāo)叉(chā)感(gǎn)染。