上過微生(shēng)物相(xiāng)關課(kè)程(chéng)的同(tóng)學，大抵都(dū)對(duì)菌(jūn)液的OD600測(cè)量還有(yǒu)點印象：需(xū)要(yào)將樣(yàng)本(běn)稀釋到合(hé)適的濃(nóng)度，然(rán)後取(qǔ)樣(yàng)置於比(bǐ)色皿內，在(zài)分光光度計中測(cè)量600nm波(bō)長(cháng)下的(dí)OD值(zhí)。此外(wài)，也(yě)會有(yǒu)一(yī)個(gè)模糊的(dí)印象，當OD為1時(shí)1mL菌液(yè)中大概對(duì)應(yīng)了多(duō)少數量的細胞(bāo)。

　　網絡搜索(suǒ)1 OD與(yǔ)菌液濃度(dù)的(dí)對應關(guān)係(xì)時，發現給到的數(shù)據區(qū)間(jiān)非(fēi)常(cháng)大(dà)，從(cóng)1×10^7 ~2×10^9 cells/mL不(bù)等(děng)，但(dàn)基本(běn)都(dū)會提(tí)到需要結(jié)合具(jù)體的菌(jūn)種進行分析(xī)，培養物(wù)中(zhōng)細菌細胞的(dí)大小和形狀(zhuàng)會對(duì)OD600數(shù)值(zhí)產生影響。

細胞(bāo)大(dà)小對OD600的(dí)影(yǐng)響

　　Keiran Stevenson等研究人員製備了(liǎo)不同直徑(jìng)的(dí)微(wēi)珠的(dí)分散(sàn)溶液(圖1)，每(měi)種溶液(yè)的(dí)濃(nóng)度和吸光度之間的(dí)標準曲綫(xiàn)如圖2A所示，在相同的OD600數(shù)值(zhí)情況下，隨著微(wēi)珠的直(zhí)徑減(jiǎn)小，對應的微珠(zhū)濃度顯著增(zēng)加(圖2B)。

▲圖1 微珠(zhū)的(dí)明場圖像。A：15.7±1.4 μm;B：10.0±0.6 μm;C：3.00±0.07 μm;D：0.96±0.07 μm;E：0.51±0.01 μm。E中給出的刻度尺(chǐ)適(shì)用於A-E。

▲圖(tú)2  球(qiú)形(xíng)微(wēi)珠懸浮液(yè)的OD600測(cè)量。（A）對(duì)於給定(dìng)的珠子直(zhí)徑，微(wēi)珠懸(xuán)浮液的濃(nóng)度(dù)與OD600之(zhī)間(jiān)的(dí)關係。（B）微珠(zhū)濃度與微珠(zhū)直(zhí)徑之間的(dí)關係，同一條(tiáo)曲綫上的點(diǎn)擁(yōng)有相(xiāng)同的OD600值(zhí)，隨著箭(jiàn)頭的方(fāng)向(xiàng)，曲綫從(cóng)黑(hēi)到(dào)紅分別對(duì)應以下OD600值：0.05，0.1，0.5，1和10。每(měi)組(zǔ)5個重復(fù)，由(yóu)於(yú)差異較小(xiǎo)，部分數據重疊(dié)。

細(xì)胞(bāo)形狀(zhuàng)對(duì)OD600的(dí)影響

　　Keiran Stevenson等(děng)研(yán)究人員還研(yán)究了(liǎo)真(zhēn)實的(dí)微(wēi)生(shēng)物形狀和大小(xiǎo)對(duì)OD600的影響。不同遺傳背景的酵母，不同生(shēng)長環(huán)境的大腸杆(gān)菌的(dí)顯微鏡圖(tú)片(piàn)如(rú)圖3所示(shì)：酵母二倍(bèi)體的體積大於酵母單倍體(圖3B-D);大腸杆(gān)菌在亞(yà)致死濃(nóng)度氨苄(biàn)西林(ampicillin)的作(zuò)用下(xià)被誘(yòu)導成絲狀(圖3E);對數生長(cháng)期的(dí)大腸杆(gān)菌繁(fán)殖(zhí)活躍，個體較大(dà)(圖3F);穩定期(qī)後期部(bù)分細(xì)胞死(sǐ)亡(wáng)，個(gè)體(tǐ)較小(圖(tú)3H);穩定期前(qián)期的(dí)大腸(cháng)杆(gān)菌體積處(chǔ)於兩(liǎng)者(zhě)之間(jiān)(圖3G)。

▲圖3  在顯微鏡下獲得的(dí)不(bù)同(tóng)微生物的代表性(xìng)圖(tú)像。（B）酵母(mǔ)CLN3Δ純合(hé)二倍體突(tū)變(biàn)體；（C）酵(jiào)母(mǔ)二(èr)倍體；（D）酵母(mǔ)單(dān)倍(bèi)體；（E）在亞致死(sǐ)濃(nóng)度氨(ān)苄(biàn)西(xī)林(lín)（ampicillin）存(cún)在(zài)下(xià)生長的大腸杆(gān)菌細胞(bāo)，呈(chéng)絲狀；（F）對(duì)數生(shēng)長(cháng)期的(dí)大腸杆菌細(xì)胞(bāo)；（G）穩(wěn)定期早期的大(dà)腸杆菌細胞；（H）穩定期晚期的大腸(cháng)杆(gān)菌細胞。B中給(gěi)出(chū)的刻(kè)度尺(chǐ)適用(yòng)於(yú)B-H。

　　這些微生物(wù)培養(yǎng)液(yè)的濃度和(hé)吸光(guāng)度(dù)之間的標準曲綫如圖(tú)4所(suǒ)示，與正常(cháng)的大腸(cháng)杆菌樣品相(xiāng)比(bǐ)，經(jīng)抗生(shēng)素(sù)氨(ān)苄西(xī)林誘導的絲狀大(dà)腸杆菌(jūn)細(xì)胞(bāo)的校(xiào)準(zhǔn)曲綫變化較(jiào)大(dà)。酵母(mǔ)(細(xì)胞(bāo)尺寸4~6μm)的細(xì)胞(bāo)大小變化對(duì)校(xiào)準曲(qū)綫(xiàn)的影(yǐng)響要比細菌(細胞(bāo)尺寸0.7~1.5μm)的影(yǐng)響要小(xiǎo)。

 ▲圖(tú)4  微(wēi)生(shēng)物(wù)濃度與(yǔ)OD600之(zhī)間(jiān)的關係。酵母(mǔ)CLN3Δ純(chún)合(hé)二倍體突(tū)變體(tǐ)（深灰），酵(jiào)母二(èr)倍體(淺灰)，酵母單(dān)倍體(紫(zǐ)色)，絲狀(zhuàng)大(dà)腸杆(gān)菌(綠色)，以(yǐ)及對(duì)數生(shēng)長期（黑色(sè)），穩定期(qī)早期(藍(lán)色)和(hé)晚(wǎn)期(紅色)的大腸杆菌。

　　綜(zōng)上所(suǒ)示，微生(shēng)物的形(xíng)狀(zhuàng)和大(dà)小都會(huì)對OD600測量產(chǎn)生影(yǐng)響(xiǎng)，因此(cǐ)當需要通過OD600來(lái)估算(suàn)菌液濃(nóng)度時，不同(tóng)的(dí)微(wēi)生物(wù)需要單獨(dú)製作(zuò)標準曲(qū)綫(xiàn)。

微生(shēng)物生長(cháng)曲綫(xiàn)分析(xī)儀(yí)

　　新芝生物MGC係(xì)列(liè)微生(shēng)物生(shēng)長(cháng)曲綫(xiàn)分(fēn)析儀不僅(jǐn)具有(yǒu)高(gāo)通(tōng)量培養，全自(zì)動檢測，實(shí)時顯(xiǎn)示(shì)生長曲(qū)綫(xiàn)的(dí)功(gōng)能，還(huán)具有標(biāo)準曲綫分(fēn)析(xī)功能，可(kě)以(yǐ)分析(xī)300-850nm全(quán)光(guāng)譜下每一(yī)波長(cháng)的(dí)擬(nǐ)合係數，幫(bāng)助篩選(xuǎn)合適(shì)的檢(jiǎn)測波長，自動生(shēng)成(chéng)標準(zhǔn)曲(qū)綫方(fāng)程(chéng)。MGC係(xì)列微生(shēng)物生長曲(qū)綫(xiàn)分(fēn)析儀將(jiāng)成(chéng)為(wéi)您(nín)科(kē)研路(lù)上(shàng)的得力(lì)助手(shǒu)。