實驗目的

　　多(duō)肽疫(yì)苗(miáo)是(shì)按照(zhào)病(bìng)原體抗(kàng)原基(jī)因中(zhōng)已知或(huò)預測的某(mǒu)段抗原表(biǎo)位(wèi)的氨基酸(suān)序列，通過化(huà)學合成技(jì)術(shù)製(zhì)備的疫(yì)苗(miáo)
。基(jī)於脂質的(dí)遞送係(xì)統已被確立為誘導(dǎo)體(tǐ)液和(hé)細胞免(miǎn)疫反(fǎn)應的強大遞送係(xì)統，目(mù)前應(yīng)用最(zuì)為廣泛的(dí)是脂質(zhì)體(tǐ)和脂質納(nà)米粒(lì)(lipid nanoparticle, LNP)
。脂(zhī)質體可以(yǐ)包裹水溶性和脂(zhī)溶(róng)性藥物，增(zēng)強抗原蛋白(bái)的穩(wěn)定性(xìng)，並(bìng)通(tōng)過(guò)儲存(cún)效(xiào)應(yīng)促進疫苗成(chéng)分(fēn)的(dí)逐漸(jiàn)釋(shì)放(fàng)，更適合遞送親(qīn)水性多(duō)肽分(fēn)子，但仍(réng)存在穩定(dìng)性(xìng)較差，包(bāo)封(fēng)率較(jiào)低的問題
。本研(yán)究(jiū)選(xuǎn)擇(zé)脂質(zhì)體(tǐ)作為免(miǎn)疫(yì)遞(dì)送係統構(gòu)建多(duō)肽疫苗(miáo)，設計構建(jiàn)了脂(zhī)質體(tǐ)的處(chǔ)方工藝，並通過單因素實驗(yàn)對(duì)脂質(zhì)體製備的處(chǔ)方(fāng)工(gōng)藝進行優化(huà)
。

實(shí)驗方法

　　超聲功(gōng)率的選擇

　　以優(yōu)化後的(dí)膜材比(bǐ)製備脂質體(tǐ)，在保持(chí)其他(tā)因素(sù)不改(gǎi)變(biàn)的情(qíng)況下(xià)，考慮到(dào)超(chāo)聲(shēng)功率過大(dà)會導致(zhì)大量(liáng)發熱，依(yī)次改變(biàn)超(chāo)聲功率(30，40，50，60 W)(儀器(qì)：超聲波細胞(bāo)粉碎機)，繼續(xù)進(jìn)行(háng)4組實(shí)驗(yàn)，分別測定各組脂(zhī)質(zhì)體(tǐ)粒徑(jìng)分布和多分散係數
。

　　超聲(shēng)次數/時(shí)間(jiān)的選(xuǎn)擇

　　以(yǐ)優(yōu)化後的(dí)膜材(cái)比(bǐ)，超聲功率製備脂(zhī)質體，在控製其他因素不改變的情況下，依(yī)次改變超聲次(cì)數(30,40,50,60)，繼(jì)續(xù)進行4組實驗，分別測定各(gè)組(zǔ)脂質(zhì)體(tǐ)粒(lì)徑分(fēn)布和多(duō)分(fēn)散(sàn)係數(shù)
。

實驗(yàn)結果

　　超聲功率(shuài)的(dí)篩選結果(guǒ)

　　由表1可知，當(dāng)超聲功(gōng)率為(wéi)30 W，平均粒(lì)徑(jìng)為162.2 nm，PDI為18.3%時，所(suǒ)製備的(dí)脂(zhī)質體(tǐ)最好(hǎo);當超聲功率(shuài)為60 W時，功率較(jiào)大(dà)導(dǎo)致溶(róng)液溫度(dù)明顯升高，脂質(zhì)體的(dí)粒徑偏大(dà)，PDI為0.351,分(fēn)散程度也(yě)明(míng)顯(xiǎn)變(biàn)大(dà)，不(bù)適(shì)合(hé)作(zuò)為(wéi)製備條(tiáo)件
。

　　超聲(shēng)次(cì)數的(dí)篩選結果

　　由表(biǎo)2可知(zhī)，當(dāng)超(chāo)聲次數為(wéi)40次時，所得(dé)脂(zhī)質體(tǐ)物理(lǐ)性(xìng)質(zhì)最優(yōu)
。實(shí)驗過(guò)程(chéng)中發現(xiàn)，當(dāng)超(chāo)聲(shēng)次數為60次時，置於(yú)超聲破碎(suì)機內的樣品溶(róng)液(yè)溫度較高，從表(biǎo)2結(jié)果也可(kě)以(yǐ)看出，過高的溫度(dù)導致(zhì)所(suǒ)製(zhì)備的脂質(zhì)體(tǐ)平(píng)均粒(lì)徑和PDI升(shēng)高(gāo)，提示在脂(zhī)質體製(zhì)備過程中(zhōng)要(yào)考慮(lǜ)溫度的影(yǐng)響
。

實驗討論

　　脂(zhī)質(zhì)體(tǐ)的(dí)理(lǐ)化性(xìng)質是(shì)決定(dìng)脂質體(tǐ)發揮(huī)作用效(xiào)果(guǒ)的(dí)重(zhòng)要(yào)影響(xiǎng)因素(sù)，粒(lì)徑及(jí)其(qí)分布是判斷(duàn)脂(zhī)質體是否(fǒu)合(hé)格(gé)的重(zhòng)要指標
。研究表明，納米顆(kē)粒(<200 nm)更容(róng)易通過淋巴引流進入(rù)淋巴(bā)結，並(bìng)促(cù)進(jìn)抗(kàng)原提呈(chéng)細(xì)胞(bāo)的吸收，使其(qí)更(gēng)適合(hé)傳(chuán)遞(dì)分子(zǐ)佐(zuǒ)劑和(hé)抗(kàng)原
。單(dān)因素實(shí)驗(yàn)得(dé)到的最優的製(zhì)備條件為(wéi)：膜(mó)材比5∶1，超聲(shēng)功(gōng)率(shuài)30 W，超聲(shēng)次數40次(cì)，高壓(yā)均質時間6 min，使脂質體(tǐ)的平均(jūn)粒徑(jìng)從329.7 nm減小(xiǎo)至132.0 nm，對此製備(bèi)流程進(jìn)行(háng)了(liǎo)驗證(zhèng)，其結果與(yǔ)預(yù)期相(xiāng)符，且PDI均(jūn)在30%以(yǐ)下，說明(míng)脂質(zhì)體(tǐ)粒徑(jìng)分布(bù)比較(jiào)均(jūn)匀
。