研究(jiū)背景

1.1脂(zhī)質(zhì)體(tǐ)

　　脂(zhī)質體是一種微(wēi)型(xíng)泡囊(náng)體，能將(jiāng)藥物包封於(yú)脂質(zhì)雙(shuāng)分子層內(nèi)，具(jù)有靶(bǎ)向，緩(huǎn)釋，降低(dī)藥(yào)物(wù)毒(dú)性(xìng)等諸多優點，迄今(jīn)已經在製藥(yào)，醫療，生物化學，食品(pǐn)科(kē)學，化妝品等多領域廣泛應用。評(píng)價(jià)脂(zhī)質體(tǐ)質(zhì)量(liáng)的(dí)指(zhǐ)標有(yǒu)外觀，粒(lì)徑分(fēn)布和包封率等，製備(bèi)方(fāng)法不同，脂質體的(dí)粒(lì)徑，結(jié)構(gòu)都不(bù)盡相同。脂質體(tǐ)在不(bù)同領域應(yīng)用，粒徑是衡(héng)量(liáng)脂質體內在(zài)質(zhì)量的一個(gè)重要指標(biāo)，探頭(tóu)式超聲由於(yú)操作簡便(biàn)，已(yǐ)成為製備脂(zhī)質(zhì)體主(zhǔ)要(yào)製(zhì)備(bèi)方法(fǎ)之(zhī)一(yī)，但是由於超(chāo)聲(shēng)條(tiáo)件的不同(tóng)，製(zhì)備的(dí)脂質(zhì)體(tǐ)沒(méi)有很好的(dí)重現性(xìng)。影響超(chāo)聲效(xiào)果(guǒ)因素(sù)包(bāo)括(kuò)輸入功率，作用(yòng)時(shí)間，超(chāo)聲頻(pín)率(shuài)等(děng)，通過控(kòng)製這些(xiē)因素(sù)，可以(yǐ)控(kòng)製脂(zhī)質體粒徑(jìng)的變(biàn)化(huà)，從而得(dé)到(dào)理想(xiǎng)大(dà)小的(dí)脂質體。

實驗方法(fǎ)

2.1脂(zhī)質體(tǐ)的製備

　　采(cǎi)用逆(nì)向蒸發法製(zhì)備脂質體，精密(mì)稱(chēng)取(qǔ)一(yī)定(dìng)量的(dí)卵(luǎn)磷脂，膽固(gù)醇，α-生育酚適量(liáng)混(hùn)合溶於一(yī)定量(liáng)氯(lǜ)仿(fǎng)中(zhōng)，將脂質(zhì)溶液移(yí)入250mL圓(yuán)底(dǐ)瓶中，氮氣中(zhōng)45℃恒(héng)溫水浴減(jiǎn)壓去除有機(jī)溶(róng)劑(jì)，直至(zhì)形成幹(gān)燥脂(zhī)質薄膜，待有機溶劑完(wán)全(quán)去除，停止(zhǐ)旋轉，從水浴(yù)中(zhōng)提(tí)起圓底瓶，加(jiā)入一(yī)定(dìng)濃度(dù)的PBS（pH6.5）溶液(yè)旋(xuán)轉(zhuǎn)洗膜(mó)，在45℃水(shuǐ)浴中(zhōng)水合(hé)2h即形(xíng)成乳白色脂質(zhì)體混懸(xuán)液。

2.2脂(zhī)質體溶(róng)液(yè)的超聲方法

　　圖(tú)1為(wéi)本實(shí)驗所(suǒ)用(yòng)超(chāo)聲(shēng)裝(zhuāng)置，鈦探針直徑為1.5cm，反應池(chí)為(wéi)一(yī)個開放(fàng)的玻璃燒(shāo)杯(bēi)（直徑(jìng)3cm，高(gāo)度(dù)7.5cm），冰(bīng)水浴(yù)超(chāo)聲(shēng)。實驗設置20%，30%和40%三個(gè)功(gōng)率百(bǎi)分比，超聲(shēng)處(chǔ)理脂(zhī)質(zhì)體(tǐ)，超(chāo)聲(shēng)儀探針(zhēn)距(jù)杯底深(shēn)度分(fēn)別設置為1.5和(hé)3.0cm。15ml脂(zhī)質體(tǐ)按(àn)上述條件針(zhēn)式冰(bīng)水(shuǐ)浴超聲(shēng)，超聲5次(cì)，每(měi)次時間為4mim（單次(cì)超(chāo)聲(shēng)30s，間(jiān)隔(gé)30s）。超聲完成後(hòu)，關(guān)閉超聲使(shǐ)容(róng)器(qì)冷(lěng)卻(què)，用0.22μm微(wēi)孔濾(lǜ)膜過(guò)濾(lǜ)除去(qù)鈦(tài)顆(kē)粒雜(zá)質。激光(guāng)粒(lì)度儀分析超聲對脂(zhī)質(zhì)體粒徑(jìng)分(fēn)布(bù)及對(duì)分散(sàn)係數的影(yǐng)響(xiǎng)。

實驗結(jié)果

3.1超(chāo)聲(shēng)功率(shuài)對(duì)脂(zhī)質(zhì)體(tǐ)粒(lì)徑的(dí)影(yǐng)響(xiǎng)

　　不(bù)同輸入(rù)功率，超聲時(shí)間(jiān)為20min，脂(zhī)質(zhì)體超(chāo)聲後平均粒(lì)徑(jìng)及(jí)粒(lì)徑範圍分布見(jiàn)附表(biǎo)。結果(guǒ)表(biǎo)明，隨著(zhuó)超聲(shēng)功率(shuài)的增加，脂質體(tǐ)粒(lì)徑變小，粒徑分布(bù)範圍變窄(zhǎi)，說(shuō)明高功(gōng)率超(chāo)聲得到的(dí)脂質(zhì)體粒徑更均匀。圖2為磷脂含量(liáng)為10mmol/L脂質(zhì)體(tǐ)超聲前(qián)後(hòu)粒(lì)徑圖，超聲之(zhī)前（圖(tú)2A）脂(zhī)質體粒徑(jìng)呈(chéng)單峰分布，平均粒(lì)徑為(wéi)300nm左右，隨著超聲時間的(dí)增加，超(chāo)聲(shēng)20min後(hòu)能明顯(xiǎn)觀(guān)察到粒徑變小(xiǎo)，粒徑(jìng)分布變(biàn)窄，見圖(tú)2B，超(chāo)聲(shēng)功率為(wéi)40%時，20min後獲得(dé)粒徑約為70nm左右(yòu)的(dí)單(dān)峰(fēng)分(fēn)布的脂(zhī)質(zhì)體。

3.2超聲(shēng)時間(jiān)對脂(zhī)質(zhì)體(tǐ)粒徑的(dí)影響

　　如圖3所示，超(chāo)聲功(gōng)率分別(bié)為20%，25%，30%，35%，40%，增加超聲(shēng)時間，磷脂含量(liáng)為10mmol/L的脂質體粒徑變化，結果(guǒ)顯(xiǎn)示，隨著(zhuó)超(chāo)聲(shēng)時間(jiān)的(dí)增加(jiā)，脂質體粒(lì)徑減(jiǎn)小，直(zhí)到(dào)20min時(shí)得到一個(gè)穩定的脂(zhī)質體(tǐ)粒(lì)徑(jìng)，不再(zài)發(fā)生變(biàn)化(huà)。為(wéi)了證實超聲時間(jiān)足夠形成(chéng)穩定(dìng)的脂質(zhì)體粒(lì)徑，增(zēng)加超(chāo)聲時(shí)間(jiān)到25min，考察脂質體的(dí)粒徑(jìng)分布。

3.3超聲時(shí)間對脂質體粒徑的影(yǐng)響

　　設定中高低三個超(chāo)聲(shēng)輸(shū)入功率(shuài)20%，30%和40%，燒杯底(dǐ)部(bù)和(hé)探頭的距(jù)離分別為10和(hé)15mm。在不同的(dí)超(chāo)聲(shēng)功率和深度(dù)下，超聲時間(jiān)不(bù)同，得到不同(tóng)粒徑的(dí)脂質體(tǐ)。圖4顯(xiǎn)示的是磷(lín)脂含(hán)量(liáng)為10mmol/L的脂質體，應用超聲功(gōng)率分別為(wéi)20%，30%和(hé)40%，粒徑隨(suí)超(chāo)聲(shēng)時間的(dí)變化(huà)圖(tú)，結(jié)果表明，隨著超(chāo)聲(shēng)時間的延長，脂(zhī)質體粒(lì)徑(jìng)降低，直到(dào)超(chāo)聲時間為20min，脂質體(tǐ)粒徑不在變化，從圖(tú)中還(huán)可(kě)以看出，隨(suí)著超聲功(gōng)率(shuài)的增加，脂(zhī)質體粒(lì)徑降低。應用不(bù)同的超(chāo)聲時間和不(bù)同(tóng)的(dí)深度(dù)，獲(huò)得的(dí)脂質體粒徑(jìng)也不同(tóng)。考慮(lǜ)到連(lián)續(xù)的超(chāo)聲時(shí)間和功率(shuài)，深(shēn)度為15mm時，獲(huò)得(dé)的脂(zhī)質體粒徑(jìng)更佳(jiā)。15mm與(yǔ)10mm探針深(shēn)度獲得的(dí)脂質體粒徑(jìng)並(bìng)沒有(yǒu)明顯(xiǎn)區別，然而在(zài)10mm時(shí)，脂(zhī)質體空化現象更為(wéi)明顯(xiǎn)，促進羥(qiǎng)基(jī)自由(yóu)基(jī)的形成，造成脂質(zhì)體成分(fēn)中磷脂的(dí)氧化。15mm深(shēn)度時(shí)磷脂發生氧化的機率(shuài)更低。這點在應用不(bù)飽和(hé)磷脂製備脂(zhī)質體時尤(yóu)其重要(yào)，因(yīn)為不(bù)飽(bǎo)和磷脂容(róng)易氧化。從圖中可(kě)以看出，功(gōng)率越高，超(chāo)聲得到(dào)的(dí)脂質體(tǐ)分散係(xì)分散得越(yuè)均(jūn)匀，隨著功率的(dí)增(zēng)加，粒(lì)徑和分(fēn)散率(shuài)降(jiàng)低(dī)，但(dàn)超聲(shēng)時(shí)間過長，超(chāo)聲探頭會(huì)釋放更(gēng)多鈦(tài)顆(kē)粒雜質(zhì)，造(zào)成汙染。因此(cǐ)，超聲條件(jiàn)為探針(zhēn)深(shēn)度為15mm，超聲(shēng)功率為40%，超聲(shēng)時間(jiān)為(wéi)20min時，得(dé)到(dào)的脂(zhī)質體粒(lì)徑和分散度最好。

討論

4.1新芝生物(wù)·全球(qiú)樣品製(zhì)備專家

　　超(chāo)聲(shēng)波是由一係(xì)列疏密(mì)相間(jiān)的縱波構成(chéng)的，並(bìng)通過(guò)液體介(jiè)質(zhì)向四(sì)周(zhōu)傳(chuán)播。通過研究脂質(zhì)體(tǐ)製備過程中(zhōng)超聲(shēng)對(duì)其(qí)影響，來達(dá)到(dào)控製(zhì)脂(zhī)質(zhì)體(tǐ)性(xìng)質(zhì)的(dí)目的，實驗結果表明，影響(xiǎng)脂(zhī)質體粒(lì)徑(jìng)分布(bù)範圍(wéi)和(hé)zeta電(diàn)位(wèi)的(dí)三個超(chāo)聲參數(shù)分(fēn)別(bié)為
：超聲深(shēn)度(dù)，功率輸入和超(chāo)聲時間(jiān)。因此，為獲得(dé)的均(jūn)一(yī)性較好的(dí)脂質體應(yīng)該從此三方(fāng)麵(miàn)進行(háng)探索(suǒ)。

　　新芝(zhī)生物作為全球樣品製備(bèi)專家(jiā)，深(shēn)耕超(chāo)聲(shēng)技術多年(nián)，產品(pǐn)功(gōng)能(néng)齊(qí)全(quán)，超聲產(chǎn)品具有功率調(tiáo)控，時間調(tiáo)控和(hé)超聲深度調(tiáo)控等(děng)多方(fāng)麵(miàn)功能(néng)。從(cóng)用戶實(shí)際需(xū)求(qiú)出發，能(néng)夠(gòu)為(wéi)用(yòng)戶提供(gōng)高效率(shuài)，高(gāo)性(xìng)價比的產品和(hé)解(jiě)決(jué)方(fāng)案(àn)。