磺(huáng)胺類藥(yào)物(wù)是一種(zhǒng)具有對(duì)氨(ān)基(jī)苯(běn)磺酰胺(àn)結(jié)構的抗生素(sù)，具有廣譜抗(kàng)菌(jūn)效果(guǒ)，廣(guǎng)泛(fàn)應用(yòng)於畜(xù)牧(mù)生產行(háng)業(yè)。過度使用磺胺類藥物飼(sì)養會(huì)通過動物(wù)食可用(yòng)組(zǔ)織積累(léi)在人(rén)體內，有嚴重(zhòng)副作用(yòng)和致(zhì)癌(ái)性，對人(rén)體健(jiàn)康造(zào)成損害(hài)。我國規定(dìng)所(suǒ)有(yǒu)使(shǐ)用動(dòng)物(wù)的肌肉(ròu)，脂(zhī)肪肝(gān)，腎(shèn)髒食(shí)品(pǐn)中磺(huáng)胺類(lèi)藥(yào)物的最(zuì)大(dà)殘(cán)留(liú)量為(wéi)0.1 mg/kg。因(yīn)此(cǐ)對(duì)於可食(shí)用(yòng)動物組(zǔ)織中(zhōng)的磺(huáng)胺類(lèi)藥物殘留(liú)的檢(jiǎn)測技(jì)術(shù)極(jí)其(qí)重要。

　　磺胺類藥(yào)物檢(jiǎn)測方法主(zhǔ)要有液(yè)相(xiāng)色(sè)譜法，液相(xiāng)色(sè)譜-串聯(lián)質譜法，酶(méi)聯免疫發(fā)等。其中(zhōng)2014年農質(zhì)發發布(bù)的檢測(cè)方法中(zhōng)以(yǐ)高效(xiào)液相色(sè)譜法為檢測標(biāo)準，目前(qián)許(xǔ)多檢(jiǎn)測(cè)實驗(yàn)室開(kāi)發了液相(xiāng)色(sè)譜(pǔ)-串聯質譜法(fǎ)進行(háng)樣(yàng)品中(zhōng)磺胺類(lèi)藥(yào)物(wù)的殘(cán)留，提高了檢測方法(fǎ)分辨率和檢測(cè)結果的準確(què)性。目前(qián)以官(guān)方權威(wēi)的(dí)高(gāo)效液(yè)相色(sè)譜法(fǎ)為例，對(duì)完整(zhěng)實驗過程和所需(xū)試劑(jì)和(hé)儀器設備進(jìn)行(háng)介(jiè)紹，液相色(sè)譜(pǔ)-質(zhì)譜儀(yí)聯(lián)用方法(fǎ)也會在(zài)文(wén)末補充質譜儀設(shè)置(zhì)參數。

磺胺類藥(yào)物(wù)殘留檢(jiǎn)測(cè)方(fāng)法

圖1 可食用(yòng)動(dòng)物(wù)組織磺胺類藥(yào)物(wù)殘留檢(jiǎn)測(cè)實驗(yàn)流(liú)程

　　1.試劑(jì)配置

　　配置95%，80%乙(yǐ)腈溶液(含(hán)0.2%甲酸)，配置標準液(yè)儲備液1mg/mL，梯度稀(xī)釋配(pèi)置樣(yàng)品工作(zuò)液(yè)，配置完成(chéng)後保存。

　　2.樣(yàng)品(pǐn)前處理取(qǔ)檢測樣(yàng)品(pǐn)和(hé)對(duì)照(zhào)樣(yàng)品(pǐn)利用(yòng)高速分(fēn)散器(qì)(高速(sù)匀(yún)漿(jiāng)機)對樣品(pǐn)進(jìn)行(háng)均(jūn)質(zhì)分(fēn)散(sàn)，利用超(chāo)聲(shēng)波細胞粉(fěn)碎(suì)機對細胞進(jìn)行進一(yī)步(bù)破碎(suì)，完全釋(shì)放(fàng)出細胞內(nèi)含(hán)物。

　　我們新(xīn)芝為(wéi)客戶(hù)提供兩種能(néng)夠進(jìn)行組織(zhī)分(fēn)散儀(yí)器(qì)，S10手提式高(gāo)速匀(yún)漿(jiāng)機(jī)以(yǐ)及(jí)XHF-DY高速分散(sàn)器分(fēn)別能夠故(gù)處理(lǐ)小體積(jī)(1-120mL)和(hé)大體積(jī)(3-1000mL)處理量，供需選(xuǎn)擇。同(tóng)時提(tí)供(gōng)超聲(shēng)波細胞(bāo)粉碎機(jī)SCIENTZ-IID進(jìn)行(háng)(0.5-600mL樣品量(liáng))細(xì)胞的(dí)破碎處理。

　　下圖(tú)是具(jù)體性能和(hé)參(cān)數：

圖(tú)2S10手提式高(gāo)速匀漿(jiāng)機(jī)性(xìng)能(néng)圖

圖3XHF-DY高速分散(sàn)器(qì)性能圖

圖4超(chāo)聲細胞(bāo)破(pò)碎儀性(xìng)能

　　3.標準曲綫(xiàn)繪(huì)製分別(bié)準確量取(qǔ)磺胺類藥物標準品工(gōng)作液，用(yòng)梯度稀(xī)釋成濃(nóng)度為0.05，0.1，0.5，1.0，5.0µg/mL(流動相(xiāng)稀釋)係(xì)列混合(hé)標(biāo)準溶(róng)液(yè)並進行測(cè)量(liáng)，繪製標準(zhǔn)曲(qū)綫(xiàn)

　　4.提取稱取(qǔ)試料5(±0.05)g於50 mL離心(xīn)管(guǎn)中(zhōng)，加入無水硫(liú)酸(suān)鈉4 g，乙腈15 mL，以(yǐ)10000r/min以上(shàng)的速(sù)度均質60 s後，以(yǐ)5000 r/min速度離心5 min，將(jiāng)上層溶液(yè)轉移(yí)到(dào)另(lìng)一離心(xīn)管中(zhōng)，下層殘渣加乙(yǐ)腈15 mL，渦旋混(hùn)匀1 min，5000 r/min速度(dù)離(lí)心5 min，合(hé)並兩(liǎng)次的(dí)上(shàng)清(qīng)液於同一(yī)離心管中(zhōng)，加正己烷10 mL，振(zhèn)蕩5 min，靜置或離(lí)心分(fēn)層(céng)後，取(qǔ)下(xià)層(céng)液(yè)體(tǐ)，加(jiā)入正丙醇5 mL，50℃氮吹幹(gān)，加(jiā)95%乙(yǐ)腈溶液3 mL，渦旋(xuán)混(hùn)合1 min，超聲(shēng)萃取(qǔ)2 min，作(zuò)為備(bèi)用(yòng)液。

　　新(xīn)芝(zhī)能夠(gòu)為客戶提(tí)供高速(sù)冷(lěng)凍(dòng)離(lí)心(xīn)機(jī)HSC-2015L和HSC-3020L兩款(kuǎn)，其(qí)中HSC3020L是(shì)前一(yī)款(kuǎn)的升級(jí)款。提供DT係列(liè)的超聲波清洗(xǐ)機(jī)，助力超聲(shēng)萃取，提(tí)高檢測(cè)準確度(dù)。同(tóng)時可(kě)應(yīng)用於(yú)超濾(lǜ)和(hé)液相檢測前脫氣功(gōng)能(néng)：

圖(tú)5高速冷凍離心機(jī)性(xìng)能(néng)圖

圖6超聲清洗(xǐ)機性(xìng)能圖

　　5.樣(yàng)品(pǐn)淨化取95%乙(yǐ)腈溶(róng)液(yè)3mL活化鹼(jiǎn)性氧(yǎng)化鋁小柱，將上(shàng)述備(bèi)用液全部過柱。用(yòng)95%乙(yǐ)腈溶液5mL滌(dí)雞(jī)心瓶(píng)後過柱，不(bù)收集(jí)，擠幹(gān)或負(fù)壓抽(chōu)幹(gān)柱子裏(lǐ)的液(yè)體，用80%乙腈(jīng)溶液10mL洗脫，收集洗(xǐ)脫液，加(jiā)入正(zhèng)丙(bǐng)醇(chún)5 mL後(hòu)，50℃氮吹幹，準確加入流(liú)動相(xiāng)溶解2.0mL，渦旋混合(hé)1 min，超聲(shēng)2 min，過0.22µm濾膜(mó)後，取(qǔ)濾液(yè)上機分析。

　　6.測(cè)定高效液(yè)相(xiāng)色譜參(cān)考(kǎo)條(tiáo)件(jiàn)色(sè)譜柱： C18，250mm×4.6mm(i.d.)，粒徑5µm，或相當(dāng)者;流動(dòng)相(xiāng)：乙(yǐ)腈(jīng)-甲醇(chún)-水-冰乙(yǐ)酸(suān)(2+2+9+0.2);流速：1mL/min;檢測波長：270nm;進(jìn)樣量(liáng)：20µL;柱(zhù)溫(wēn)：30 ℃質譜儀參(cān)考(kǎo)條(tiáo)件(AB SCIEX API 4000+質(zhì)譜聯(lián)用(yòng)儀)電噴霧離子源(ESI)：正離子電離(lí)模式(shì);去溶劑溫度(dù)：550 °C;氣簾氣(qì)壓力：172 kPa;碰撞氣壓(yā)力：41 kPa;離子(zǐ)氣1壓(yā)力(lì)：414 kPa;離子(zǐ)氣(qì)2壓(yā)力：379 kPa;噴(pēn)霧(wù)電壓(yā)：5500 V;掃描方(fāng)式(shì)：依(yī)賴保(bǎo)留(liú)時(shí)間(jiān)的多反應(yīng)監測(scheduled MRM)